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渦漩混勻器使用的標準操作規(guī)程
渦漩混勻器主要適用于醫(yī)學、生物工程、化學、醫(yī)藥等研究領域,是生物實驗室對各種試劑、溶液、化學物質進行固定、振蕩、混勻處理的必備常規(guī)儀器,那么對于渦漩混勻器我們該如何正確使用呢?
渦漩混勻器在生物學中的分子生物學中,我們經常要做細胞質粒DNA的提取和檢測的試驗,以便可以獲得DNA樣本,或者用于電泳檢測分析,了解樣品中是否含有質粒DNA,并判斷分子量的大小等等,因此,質粒DNA的提取是基因工程實驗中最常用的手段之一。
下面先為大家什么是質粒,質粒存在于許多細菌以及酵母菌等生物中,是細胞染色體外能夠自主復制的很小的環(huán)狀DNA分子。質粒是一種染色體外的穩(wěn)定遺傳銀子,大小從1kb到200kb不等,大多數來自細菌的質粒是雙鏈、共價閉合環(huán)狀的分子,并以超螺旋形式存在于宿主的細胞質中。它是細菌內的共生型遺傳因子,主要發(fā)現(xiàn)于細菌、放線菌和真菌細胞中,質粒具有自主復制和轉錄能力,能在子代細胞中保持恒定的拷貝數,并表達所攜帶的遺傳信息。
質粒的分離是利用質粒DNA和染色體DNA在變性與復性中的差異來達到的目的。當菌體在NaOH和SDS溶液中裂解時,蛋白質與DNA發(fā)生變性,由于染色體DNA與質粒DNA拓撲構型不同,染色體DNA雙螺旋結構解開,而共價閉合質粒DNA的氫鍵雖被斷裂,但兩條互補鏈彼此相互盤繞仍會緊密地結合在儀器。當加入中和液后,溶液pH恢復至中性,在高鹽濃度的情況下,染色體DNA之間交聯(lián)形成不溶性網狀結構并與蛋白質SDS復合物等形成沉淀;不同的是質粒DNA復性迅速而準確,保持可溶狀態(tài)而留在上清中。這樣,通過離心可沉淀大部分細胞碎片、染色體DNA、RNA及蛋白質。除去沉淀后上清中的質粒可用酚氯仿抽提進一步純化質粒DNA。
提取質粒DNA最常見的方法是堿裂解法,具體步驟如下:首先講含有質粒的細菌接種到培養(yǎng)基,經過大約12小時的恒溫搖陪后棄去上清液,加入中和液后用渦漩混勻器將溶液充分混勻,然后加入堿液進行沉淀,這就是變性與復性,最后的操作就是實驗室常用的沉淀的分離、純化。分離、純化DNA首先取上清液,加入分離液后采用渦漩混勻器混勻溶液,離心取上清液,加入無水乙醇后混勻,離心后棄上清液,干燥DNA即可。
在這個實驗中,我們需要用到渦漩混勻器進行溶液混勻,本公司生產的渦漩混勻器可滿足每一個實驗室的需要和安全標準,該渦漩混勻器帶有光電感應,檢測到儀器上方有手靠近,儀器即自動開始震動混勻,不需要施加任何外力,震動速度可調,時間可設,有“光電感應”、“連續(xù)”兩種安全操作模式可選擇,渦漩混勻器穩(wěn)定性高,非常適合細胞質粒提取實驗。
渦漩混勻器的使用方法:
在使用渦漩混勻器前,請先檢查整機配件是否齊全。打開電源開關,即開始工作,工作時根據你手中的壓力輕重,試管中的溶液均勻便能快能慢。使用試管和比色管,最好需混勻的溶液不超過試管的二分之一為最佳,需要均勻溶液較多時,請用三角瓶。為確保安全,使用結束時,請關閉電源,渦漩混勻器應保持清潔干燥,嚴禁溶液進入機內,以免損壞機件。
渦漩混勻器的使用注意事項:
1.使用該儀器時應放在較平滑的平面或者玻璃臺面上。
2.如果開啟電源開關后,電機若是無響應,應先檢查插頭接觸是否良好,保險絲是否燒斷(應斷電進行)。
3.為了使渦漩混勻器工作時平衡性能好,避免產生較大振動,裝瓶時應將所有試瓶分布均勻,各瓶的容液應大致相等。
4.接通電源,打開電源開關,指示燈亮,再對機器進行調速后,再按啟動按鈕,儀器啟動完畢。
5.本儀器使用結束后要注意妥善保管,應放在干燥、通風、無腐蝕性氣體的地方,使用中切勿使液體流入機芯,以免損壞器件。
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